Es mesura la velocitat inicial (µmol/min) d'un enzim a quatre concentracions de substrat, sense inhibidor i en presència de dos inhibidors diferents, I1 i I2 (sempre la mateixa quantitat d'enzim, 37 °C i pH 7):
• [S] = 1 mM: sense inhibidor 33,3; amb I1 14,3; amb I2 16,7.
• [S] = 2 mM: 50,0; 25,0; 25,0.
• [S] = 4 mM: 66,7; 40,0; 33,3.
• [S] = 8 mM: 80,0; 57,1; 40,0.
Per obtenir Vmaˋx i KM es fa servir la representació de dobles inversos (Lineweaver-Burk): v1 = (KM/Vmaˋx) · ([S]1) + Vmaˋx1, que és una recta.
a) Calcula v1 per a [S] = 1 mM i [S] = 8 mM en els tres casos, i a partir d'aquests dos punts obtén el pendent, l'ordenada a l'origen, Vmaˋx i KM de cada sèrie.
b) Raona quin tipus d'inhibició produeix cada inhibidor a partir dels canvis de Vmaˋx i KM, i on s'uneix cada un a l'enzim.
c) Què passaria amb cada inhibició si s'augmentés molt la concentració de substrat? Justifica-ho.
d) Explica el significat biològic de la KM i per què un enzim amb una KM baixa és avantatjós quan el substrat és escàs.
Pista 1
Fes els inversos amb tres decimals: per exemple, 33,31≈0,030. Amb dos punts d'una recta en tens el pendent i l'ordenada.
Pista 2
L'ordenada a l'origen és Vmaˋx1; un cop coneguda Vmaˋx, la KM surt del pendent.
Pista 3
Un inhibidor que competeix pel centre actiu es pot «desplaçar» amb més substrat; un que deforma l'enzim en un altre lloc, no.